Dithiothreitol (DTT) ni kipunguzaji kinachotumika sana, pia kinachojulikana kama kiongeza kipya cha kijani. Ni kiwanja kidogo cha kikaboni cha molekuli chenye vikundi viwili vya mercaptan (-SH). Kutokana na sifa zake za kupunguza na uthabiti, DTT hutumika sana katika majaribio ya biokemia na biolojia ya molekuli.
Jukumu kuu la DTT ni kupunguza vifungo vya disulfidi katika protini na biomolekuli zingine. Kifungo cha disulfidi ni sehemu muhimu ya kukunjwa na uthabiti wa protini, lakini chini ya hali fulani za majaribio, kama vile uchambuzi wa SDS-PAGE unaoweza kupunguzwa, kuunganishwa tena kwa protini na kukunjwa, ni muhimu kupunguza kifungo cha disulfidi hadi vikundi viwili vya thiol ili kufungua muundo wa anga wa protini. DTT inaweza kuguswa na vifungo vya disulfidi ili kuvipunguza hadi vikundi vya mercaptan, hivyo kufungua muundo wa anga wa protini na kuifanya iwe rahisi kuchanganua na kuendesha.
DTT pia inaweza kutumika kulinda shughuli na uthabiti wa kimeng'enya. Katika baadhi ya athari zinazochochewa na kimeng'enya, shughuli ya kimeng'enya inaweza kupunguzwa na kioksidishaji. DTT inaweza kuitikia na vioksidishaji ili kuvipunguza kuwa vitu visivyo na madhara, na hivyo kulinda shughuli na uthabiti wa kimeng'enya.
Ikilinganishwa na vipunguzaji vya kitamaduni kama vile β-mercaptoethanol (β-ME), DTT inachukuliwa kuwa kipunguzaji salama na thabiti zaidi. Sio tu kwamba ni thabiti katika mmumunyo wa maji, lakini pia hudumisha sifa zake za kupunguza chini ya hali ya joto kali na asidi.
Matumizi ya DTT ni rahisi kiasi. Kwa ujumla, DTT huyeyushwa katika bafa inayofaa na kisha kuongezwa kwenye mfumo wa majaribio. Kiwango bora cha DTT kinahitaji kuamuliwa kulingana na jaribio maalum, na kwa ujumla hutumika katika kiwango cha 0.1-1mM. Viwango vya chini vinaweza kupunguza athari mbaya kwenye ukuaji wa seli na vinaweza kupunguza sumu ya seli kutokana na usemi kupita kiasi wa protini lengwa. Viwango vya juu vinaweza kusababisha mzigo mkubwa wa kimetaboliki ya seli, na kuathiri ukuaji wa seli na ufanisi wa usemi.
Njia ya kubaini ukolezi bora inaweza kuwa kutathmini kiwango cha usemi wa protini lengwa kwa kufanya vipimo vya uanzishaji wa IPTG katika viwango tofauti. Vipimo vya uundaji mdogo vinaweza kufanywa kwa kutumia viwango mbalimbali vya IPTG (km 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, nk.) na athari ya usemi katika viwango tofauti inaweza kutathminiwa kwa kugundua kiwango cha usemi wa protini lengwa (km ugunduzi wa Western blot au fluorescence). Kulingana na matokeo ya majaribio, ukolezi wenye athari bora ya usemi ulichaguliwa kama ukolezi bora.
Kwa kuongezea, unaweza pia kurejelea machapisho husika au uzoefu wa maabara zingine ili kuelewa kiwango cha mkusanyiko wa IPTG kinachotumika sana chini ya hali kama hizo za majaribio, na kisha kuboresha na kurekebisha kulingana na mahitaji ya majaribio.
Ni muhimu kutambua kwamba mkusanyiko bora unaweza kutofautiana kulingana na mifumo tofauti ya usemi, protini lengwa, na hali za majaribio, kwa hivyo ni bora kuboresha kulingana na kila kesi.
Kwa muhtasari, DTT ni kipunguzaji kinachotumika sana ambacho kinaweza kutumika kupunguza vifungo vya disulfidi katika protini na biomolekuli zingine na kulinda shughuli na uthabiti wa vimeng'enya. Imetumika sana katika majaribio ya biokemia na biolojia ya molekuli.
Muda wa chapisho: Septemba-28-2023