Dithiothreitol (DTT) ni wakala wa kupunguza, unaojulikana pia kama kiongeza kipya cha kijani kibichi.Ni kiwanja kidogo cha kikaboni cha molekuli na vikundi viwili vya mercaptan (-SH).Kutokana na kupunguza sifa na uthabiti wake, DTT hutumiwa sana katika majaribio ya baiolojia na baiolojia ya molekuli.
Jukumu kuu la DTT ni kupunguza vifungo vya disulfide katika protini na biomolecules nyingine.Dhamana ya disulfidi ni sehemu muhimu ya kukunja na uthabiti wa protini, lakini chini ya hali fulani za majaribio, kama vile uchanganuzi unaoweza kupunguzwa wa SDS-PAGE, upatanisho wa protini na kukunja, ni muhimu kupunguza dhamana ya disulfidi kwa vikundi viwili vya thiol ili kufunua muundo wa anga. protini.DTT inaweza kuguswa na vifungo vya disulfide ili kuzipunguza kwa vikundi vya mercaptan, na hivyo kufungua muundo wa anga wa protini na kuifanya iwe rahisi kuchambua na kudhibiti.
DTT pia inaweza kutumika kulinda shughuli za kimeng'enya na uthabiti.Katika baadhi ya athari zinazochochewa na enzyme, shughuli ya kimeng'enya inaweza kupunguzwa na kioksidishaji.DTT inaweza kuguswa na vioksidishaji ili kuzipunguza kwa vitu visivyo na madhara, na hivyo kulinda shughuli na utulivu wa kimeng'enya.
Ikilinganishwa na vinakisishaji vya kiasili kama vile β-mercaptoethanol (β-ME), DTT inachukuliwa kuwa wakala salama na thabiti zaidi wa kupunguza.Sio tu imara katika ufumbuzi wa maji, lakini pia huhifadhi mali zake za kupunguza chini ya joto la juu na hali ya asidi-msingi.
Matumizi ya DTT ni rahisi.Kwa ujumla, DTT huyeyushwa katika bafa ifaayo na kisha kuongezwa kwa mfumo wa majaribio.Mkusanyiko bora wa DTT unahitaji kubainishwa kulingana na jaribio mahususi, na kwa ujumla hutumiwa katika safu ya 0.1-1mM.Viwango vya chini vinaweza kupunguza athari mbaya kwa ukuaji wa seli na vinaweza kupunguza cytotoxicity kutokana na udhihirisho wa kupita kiasi wa protini lengwa.Viwango vya juu vinaweza kusababisha mzigo mwingi wa kimetaboliki ya seli, kuathiri ukuaji wa seli na ufanisi wa kujieleza.
Njia ya kubainisha ukolezi bora inaweza kuwa kutathmini kiwango cha usemi cha protini inayolengwa kwa kufanya majaribio ya uingizaji wa IPTG katika viwango tofauti.Majaribio madogo ya kitamaduni yanaweza kufanywa kwa kutumia anuwai ya viwango vya IPTG (km 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mm, n.k.) na athari ya usemi katika viwango tofauti inaweza kutathminiwa kwa kugundua kiwango cha usemi wa protini inayolengwa (km Magharibi. kugundua doa au fluorescence).Kulingana na matokeo ya majaribio, mkusanyiko ulio na athari bora ya kujieleza ulichaguliwa kama mkusanyiko bora zaidi.
Kwa kuongezea, unaweza pia kurejelea fasihi husika au uzoefu wa maabara zingine ili kuelewa safu ya mkusanyiko ya IPTG inayotumiwa sana chini ya hali sawa za majaribio, na kisha kuboresha na kurekebisha kulingana na mahitaji ya majaribio.
Ni muhimu kutambua kwamba mkusanyiko unaofaa zaidi unaweza kutofautiana kulingana na mifumo tofauti ya kujieleza, protini lengwa, na hali ya majaribio, kwa hivyo ni bora kuboresha kwa misingi ya kesi baada ya nyingine.
Kwa muhtasari, DTT ni wakala wa kawaida wa kupunguza ambayo inaweza kutumika kupunguza vifungo vya disulfidi katika protini na biomolecules nyingine na kulinda shughuli za kimeng'enya na uthabiti.Imetumika sana katika majaribio ya baiolojia na baiolojia ya molekuli.
Muda wa kutuma: Sep-28-2023