Jinsi ya kuamua mkusanyiko bora?
Kwa IPTG inducer (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), mkusanyiko wa juu, bora zaidi.Mkusanyiko bora unategemea hali maalum za majaribio na athari inayotaka ya induction.
Kwa ujumla, mkusanyiko wa IPTG hutumiwa katika safu ya 0.1-1 mm.Viwango vya chini vinaweza kupunguza athari mbaya kwa ukuaji wa seli na vinaweza kupunguza cytotoxicity kutokana na udhihirisho wa kupita kiasi wa protini lengwa.Viwango vya juu vinaweza kusababisha mzigo mwingi wa kimetaboliki ya seli, kuathiri ukuaji wa seli na ufanisi wa kujieleza.
Njia ya kubainisha ukolezi bora inaweza kuwa kutathmini kiwango cha usemi cha protini inayolengwa kwa kufanya majaribio ya uingizaji wa IPTG katika viwango tofauti.Majaribio madogo ya kitamaduni yanaweza kufanywa kwa kutumia anuwai ya viwango vya IPTG (km 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mm, n.k.) na athari ya usemi katika viwango tofauti inaweza kutathminiwa kwa kugundua kiwango cha usemi wa protini inayolengwa (km Magharibi. kugundua doa au fluorescence).Kulingana na matokeo ya majaribio, mkusanyiko ulio na athari bora ya kujieleza ulichaguliwa kama mkusanyiko bora zaidi.
Kwa kuongezea, unaweza pia kurejelea fasihi husika au uzoefu wa maabara zingine ili kuelewa safu ya mkusanyiko ya IPTG inayotumiwa sana chini ya hali sawa za majaribio, na kisha kuboresha na kurekebisha kulingana na mahitaji ya majaribio.
Ni muhimu kutambua kwamba mkusanyiko unaofaa zaidi unaweza kutofautiana kulingana na mifumo tofauti ya kujieleza, protini lengwa, na hali ya majaribio, kwa hivyo ni bora kuboresha kwa misingi ya kesi baada ya nyingine.
Muda wa kutuma: Sep-28-2023